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      Celetrix電轉儀實驗操作流程

      發布時間:2021-03-29

      電轉儀基本原理

      • 電轉基本原理
      • 與電極杯比較
      • 與毛細管比較
      • mRNA電轉
      • 免疫細胞電轉
      • iPSC電轉
      • 常用細胞電轉結果

      1. 電轉儀技術原理

      細胞電轉染(電轉),也叫細胞電穿孔 (electroporation),是把外源大分子物質DNA、RNA、siRNA、蛋白質等以及一些小分子導入細胞膜內部的重要方法。

      在瞬間強大電場的作用下,溶液中細胞的細胞膜具有了一定的通透性,帶電的外源物質以類似電泳的方式進入細胞膜。由于細胞膜磷脂雙分子層的電阻很大,細胞外部電流場產生的細胞兩極電壓都被細胞膜承受,細胞質內分到的電壓可以忽略不計,細胞質內部幾乎沒有電流,因此也決定了正常范圍內的電轉過程中細胞毒性很小。電場使DNA等物質進入細胞膜后只能停止在細胞膜附近,隨后細胞本身的機制可以允許這些物質到細胞核等處。

      普通電轉能量過高可導致部分細胞因膜破壞而死亡,其中能存活下來的細胞內部都不會受到電流影響,因為細胞膜完整是細胞存活的必要條件。

      由于電轉技術依靠的是物理方法,細胞表面的分子特性對電轉影響比較小。相比化學轉染方法和病毒載體轉染方法,電轉可以用在所有的細胞種類上,而且容易定量控制。

      2. 細胞電轉電場圖

      • 細胞膜近似絕緣體,細胞附近電轉液中電流扭曲。
      • 在串聯電路中電阻越大分到電壓越大,細胞兩端電壓基本都落在兩端細胞膜上。
      • 只有一個細胞端面電轉有效。
      • 細胞質內分到電壓很小,DNA電轉進入細胞膜后馬上停止,后續靠細胞本身機制慢速擴散細胞核兩端電壓及其微小,微小的電壓又落在核膜上,核內部完全沒有電壓,電轉沒有基因毒性。

      3. 電轉儀技術應用

      有效的細胞:幾乎所有的真核細胞,包括所有細胞系,原代細胞,干細胞,血液和免疫類細胞,神經細胞,植物細胞和胚胎。

      可以電轉的物質包括DNA、RNA、siRNA、蛋白質等。

      適用實驗:瞬時或穩定表達蛋白質、基因敲除與敲入、siRNA和其他分子機制研究。

      科研領域:細胞分子生物學、免疫學、血液學、神經學、癌癥研究、新藥開發等。

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